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細(xì)胞培養(yǎng)的步驟及其注意事項!
更新時間:2022-03-02瀏覽:1998次

  細(xì)胞培養(yǎng)的步驟及注意事項


  一、 復(fù)蘇

  1. 把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺里。

  2. 把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

  3. 把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動,使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。

  4. 標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。

  5. 3天換一次培養(yǎng)基。

  二、 傳代

  1. 培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時要傳代。

  2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。

  3. 加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行),消化1-2分鐘。

  4. 細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

  5. 用移液槍吹打細(xì)胞,把細(xì)胞都懸浮起來。

  6. 把細(xì)胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

  7. 倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細(xì)胞都吹起來。

  8. 根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般,癌細(xì)胞分5個,正常細(xì)胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。

  三、 凍存把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細(xì)胞種類,凍存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。 凍存液的配制: 70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

  細(xì)胞培養(yǎng)的步驟及注意事項,先和大家介紹到這,如果想要了解更多離心管的信息,可以關(guān)注天津本生生物,專用給生物醫(yī)藥客戶提供生物實驗室檢測耗材,歡迎廣大客戶來詢。

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