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　　以下是關(guān)于大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明：

　　BS-3461   大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒

　　一、檢測(cè)原理

　　采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入預(yù)先包被NN-T4抗體的酶標(biāo)板中，經(jīng)溫育后形成抗體-抗原復(fù)合物，洗滌后加入酶標(biāo)工作液，再次溫育后形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。加入底物TMB顯色，顏色深淺與NN-T4濃度呈正相關(guān)。

　　二、樣本要求

　　血清/血漿?：采集后室溫靜置2小時(shí)或4℃過夜，1000g離心20分鐘取上清，避免反復(fù)凍融。

　　組織勻漿?：用預(yù)冷PBS(0.01M, pH=7.4)按1:9重量體積比勻漿，5000×g離心5-10分鐘取上清。

　　注意事項(xiàng)?：含NaN3的樣本會(huì)抑制HRP活性，需避免使用。

　　三、實(shí)驗(yàn)步驟

　　試劑準(zhǔn)備?：將濃縮洗滌液稀釋30倍，標(biāo)準(zhǔn)品按說明書稀釋。

　　加樣?：標(biāo)準(zhǔn)品和樣本分別加入對(duì)應(yīng)孔位，建議做復(fù)孔。

　　孵育?：37℃溫育60分鐘，洗滌去除未結(jié)合物。

　　加酶標(biāo)抗體?：加入HRP標(biāo)記抗體，再次溫育30分鐘并洗滌。

　　顯色?：加入TMB底物A/B液，避光反應(yīng)15分鐘。

　　終止與檢測(cè)?：加終止液后，450nm波長(zhǎng)測(cè)OD值。

　　四、數(shù)據(jù)處理

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　根據(jù)樣本OD值計(jì)算NN-T4濃度，板內(nèi)/板間變異系數(shù)應(yīng)<10%。

　　五、注意事項(xiàng)

　　試劑盒需2-8℃保存，有效期通常為6個(gè)月。

　　顯色時(shí)間需嚴(yán)格控制，避免過度反應(yīng)。

　　實(shí)驗(yàn)環(huán)境需清潔，避免交叉污染。

　　如需更詳細(xì)的參數(shù)(如標(biāo)準(zhǔn)品濃度范圍、線性回收率等)，建議參考試劑盒配套說明書。

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